Lys C/Trypsin蛋白酶联合酶切

北京生夏蛋白

Jan 4, 2022

核⼼试剂:
BT 表面活性剂 ,Trypsin蛋白酶,Lys C蛋白酶

蛋白酶Trypsin 和 Lys C是蛋白质组学研究中最常用的酶,具有特异性强、酶切效率高等优点。 在蛋白质组学研究中,一种较为常用的方法是将Lys-C与胰蛋白酶联用进行蛋白质酶切,以提高蛋白质被酶切的程度和效率。 Lys-C/Trypsin 顺序酶切不仅能显著提高肽段和蛋白质的鉴定数目,同时降低遗漏 K 酶切位点的数目及比例,而且得到的肽段长度有利于质谱鉴定,蛋白质覆盖率有明显提升。对提升蛋白质组学样本的制备质量以及蛋白质的序列鉴定覆盖度具有重要指导意义。


Lys C蛋⽩白酶过量影响蛋白组学序列列鉴定覆盖率

进⾏顺序酶切时,使⽤的蛋⽩酶量对实验结果有显著影响。Trypsin蛋⽩酶添加量1:30-50(w/w)能够使蛋⽩质酶切完全;第⼀步使⽤过量的 Ly s -C 反⽽会影响到后下⼀步Trypsin 的酶切,使蛋⽩质被酶切不彻底。在蛋⽩质组学样本制备时,Lys-C/Trypsin 顺序酶切切能够有效提升蛋⽩质组学样本的制备质量,提⾼样本检测结果,建议 Lys-C 蛋⽩酶的使⽤量1:100。


联合顺序酶切降低漏切位点及⽐例

实验结果中遗漏酶切的位点数⽬及⽐例显⽰(图3),使⽤Trypsin单独酶切时,漏切位点的⽐例约27%,其中80%为K位点漏切。进⾏Lys-C/Trypsin 联合顺序酶切,结果显⽰ K 位点漏切的⽐例显著降低。因此,综合使⽤ Lys-C 和 Trypsin 酶进⾏顺序酶切能够显著降低漏切,从⽽提⾼了质谱鉴定的重现性和定量的准确性。