LC/MS-based Biopharma PQA's solution
生物制药蛋白表征LC/MS 解决方案
所有生物制品生产许可申请 (BLA) 中，LC/MS技术解决方案已成为生物治疗蛋白表征的重要工具。生物治疗蛋白的关键质量属性 (CQAs） 包括Native Intact and subunit结构；电荷异质性（CVs）；N-聚糖型；宿主细胞蛋白残留（HCPs)和产品质量（肽段）多属性等，用于确定产品质量和临床疗效。
在生产和研发过程中。需要对生物治疗蛋白进行整体蛋白，亚型结构，PTM修饰以及肽段水平的详细表征，深入了解产品质量属性 (PQAs) 的分子水平，这些属性必须保持在严格的规范内，以确保最终产品的有效性和安全性。
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电荷异质性（CVA）分析是生物治疗蛋白的监管要求。异质分子在生产过程中可能会受到酶促翻译后修饰，例如糖基化和赖氨酸截短。此外，在纯化和储存过程中会发生化学修饰，例如氧化或脱氨。基于质谱兼容的pH离子淌度试剂用于IEX/MS高分辨技术分离和表征蛋白电荷异质性。替代传统盐梯度离子交换技术。IEX/MS联用技术分析整体蛋白电荷异质性和亚型结构中非常有用。
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N-聚糖的结构影响生物治疗性蛋白质和Fc融合蛋白。所以 N-聚糖表征对于生物治疗开发过程至关重要的。通用的 N-聚糖表征方法是使用糖苷酶释放N-聚糖，然后使用N-聚糖分子标签标记寡糖分子，基于LC（HILIC）/MS分离标记 N-聚糖进行表征和定量分析。
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多属性方法 (MAM)是基于LC/MS高分辨质谱技术的分析方法。提供了 PQAs 的详细表征和量化数据，用于生物制药 PQAs 一致性评价和质量保证（QA）。
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宿主细胞蛋白（HCP）是来自细胞培养工艺的相关杂质蛋白，会引起免疫连锁反应和产品不稳定。因此，下游纯化工艺必须去除这些杂质蛋白。ELISA方法对生物制药中残留HCPs的准确鉴定和检测高度依赖于生成多克隆抗体。但并非每种宿主蛋白都会产生用于 ELISA 检测的抗体。导致 ELISA 方法定量不准确。此外，ELISA 无法识别特定的宿主蛋白。基于LC/MS高分辨质谱技术可以准确鉴定和定量宿主细胞残留杂质蛋白。
eFASP样品前处理方法是基于质谱级表面活性剂和无盐蛋白酶而开发验证的。提高了灵敏度、回收率，多肽的覆盖率。速度快，方法标准化。
定量蛋白质组学和生物制药抗体表征以及HCP研究的完整性取决于所使用的蛋白质提取、变性、酶解和多肽脱盐方法的重复性和回收率。常规变性剂，还原烷基化试剂及缓冲液的组合使用可以成功使蛋白大分子转变为多肽小分子用于LC-MS定性定量分析。
传统技术去除这些污染物和人为添加的变性剂（SDS，尿素，盐酸胍和还原试剂）的方法会导致大量PTM修饰肽损失，回收率低下和重复性差。